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BUNSEN本生分享:熒光定量PCR耗材的選擇
更新時間:2024-02-18瀏覽:1063次

  BUNSEN本生分享:熒光定量PCR耗材的選擇


  PCR是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)實驗,用于在短時間內(nèi)將單拷貝的目標(biāo)DNA序列擴增至數(shù)百萬拷貝。除了選擇可靠的PCR儀外,用于PCR反應(yīng)的塑料耗材除考慮兼容性,還要求避免存在污染物和抑制劑,同時又具有可保障最佳PCR效果的高質(zhì)量。因此,如何選擇作為用戶,了解如何選擇PCR / qPCR耗材,顯得尤其重要。

  第一步,選擇通量

  根據(jù)樣品數(shù)量選擇通量,PCR耗材的最常見規(guī)格為:

  管:0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

  96 孔板:0.2 mL, 0.1 mL

  384 孔板:0.02 mL

  單管

  8聯(lián)管

  96孔板

  384孔板

7.jpg

  第二步, 選擇加樣體積:不同類型管,可供選擇的容量體積不同。

  單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容,或稱快速)

  8聯(lián)管: 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容,或稱快速)

  96 孔板:0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容,或稱快速)

  384 孔板:0.02 mL

  “(低容)"意味著高度更低。 低容耗材更短的設(shè)計程度減少了反應(yīng)體系上方的空間,降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導(dǎo)效率,因此也被稱為“快速"管或板。

  第三步, 對于PCR板的選擇,需要進(jìn)一步根據(jù)實驗類型和儀器選擇裙邊、切割角、顏色等。

  3.1裙邊: 根據(jù)儀器加熱模塊類型選擇

  無裙邊:

  兼容絕大多數(shù)PCR儀和實時PCR儀的模塊,易于剪裁,但不適用于自動化應(yīng)用。

  半裙邊:

  板的邊緣周圍具有短的邊緣,加熱或移液過程中提供足夠的支撐,不宜變形彎曲

  全裙邊:

  有覆蓋板高度的邊緣,適用于自動化操作

  3.2顏色: 透明或白色

  PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的顏色形式,以適用于不同類型PCR反應(yīng)。在實時PCR的反應(yīng)時,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色塑料耗材,以實現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測。

  白色耗材通過阻止熒光折射出管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時,更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比(圖B)。此外,白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號,從而使重復(fù)實驗中的差異降至低。在極少數(shù)情況下,如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強而過飽和,可以使用磨砂孔替代。

  3.4 切角

  切角是對PCR板的一個角缺失,取決于所需要適配的儀器。切角可能位于96孔板的H1,H12或A12位置,或384孔板的A24位置

  3.5品牌選擇

  市場上有許多品牌和廠家提供PCR耗材,選擇時需要考慮哪些因素呢? PCR耗材品質(zhì)由包括原料、無污染、一致性等決定。

  1. 原料:Thermo Scientific選用優(yōu)質(zhì)的全新醫(yī)用級聚丙烯原料

  2. 生產(chǎn)環(huán)節(jié):十萬級潔凈車間生產(chǎn),無RNase、DNase和外源DNA污染

  3. 批間一致性:遵循嚴(yán)格的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和檢測標(biāo)準(zhǔn),由資深專家使用的設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn),確

  保批間一致性和可追溯性,確保用戶獲得可靠PCR實驗數(shù)據(jù)。

  第四步,選擇正確的PCR膜

  PCR板選好后,還需要選擇一張好的PCR膜來密封,才能保證獲得準(zhǔn)確可靠的PCR數(shù)據(jù),這對實時PCR尤其重要!

  我們的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(貨號AB1170)產(chǎn)品采用壓力敏感密封設(shè)計。只有在施加壓力的情況下,這種非粘性粘合產(chǎn)品才可以粘合到孔的邊緣上。其只在需要粘合的位置產(chǎn)生良好的密封效果,使孔開口位置變得超透明,實現(xiàn)的熒光信號傳輸。

  強效壓敏粘附,可產(chǎn)生牢固的粘合效果,以盡量減少蒸發(fā),使每個樣本保持較高的PCR效率

  其光學(xué)透明度可用于qPCR及其他熒光應(yīng)用

  一致的封口厚度和透明度,確保整塊板信號傳輸相等

  可剝離,剝離后平板上無粘性殘留

  膜兩端無粘性,輕松進(jìn)行密封和去除操作

  適用溫度范圍:–80°C至110°C

  PCR耗材 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

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